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國立中興大學 分子生物學研究所 陳良築所指導 賴彥勳的 利用植物生產降血脂活性胜肽 VVYP 之研究 : 以攜有 VVYP 之大豆改造蛋白基因 Gy5 之轉殖分析 （2010），提出CRWD關鍵因素是什麼，來自於活性胜肽、活性胜肽、活性胜肽、活性胜肽。

而第二篇論文國立中興大學 農藝學系所 王強生所指導 蘇柏昀的 影響大豆農桿菌媒介基因轉殖因子之探討 （2010），提出因為有 大豆、農桿菌、基因轉殖的重點而找出了 CRWD的解答。

最後網站Crowdstrike控股公司-CRWD-基本資料-MoneyDJ理財網則補充：CrowdStrike Holdings, Inc.(CRWD.US)成立於2011，總部位於美國加州Sunnyvale，在美國開發安全解決方案，提供雲端安全解決方案Falcon平台，保護在各種端點預設、虛擬化及 ...

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利用植物生產降血脂活性胜肽 VVYP 之研究 : 以攜有 VVYP 之大豆改造蛋白基因 Gy5 之轉殖分析

為了解決CRWD的問題，作者賴彥勳 這樣論述：

活性胜肽 Val-Val-Tyr-Pro (VVYP) 為抑制腸道吸收三酸甘油酯之重要因子，其可經由促進肝臟 HTGL (hepatic triglyceride lipase) 之活性來降低三酸甘油酯之濃度達到降血脂之作用。本研究透過基因工程改造大豆儲藏性蛋白基因 Gy5，使其攜帶有 10 套降血脂活性胜肽 VVYP 之胺基酸序列，透過農桿菌轉殖技術，將含有 VVYP 之 Gy5 基因分別轉殖大豆及稻米，使其能大量表現帶有 VVYP 之 Gy5 基因，希望透過食用含 VVYP 之稻米及大豆，經由消化道酵素分解、吸收後，達到降血脂之功效，可大幅提高稻米及大豆之附加價值。轉殖水稻部分，利用水稻

種子專一性 Glutelin 啟動子；轉殖大豆部分，利用大豆種子專一性 β-conglycinin α-subunit 啟動子 (BCAP) 及持續性表現 CaMV35S 啟動子，驅動降血脂活性胜肽 VVYP 10 套之胺基酸序列。另外透過人工合成 miRNA159-Gy5 (artificial microRNA)，針對大豆內生性 Gy5 基因進行靜默，希望能抑制其原有之儲藏性蛋白 Gy5 之表現，使改造過之外來基因 Gy5-10VVYP 之表現量增加。由於大豆轉殖的困難，本研究也擬建立一個較完善、適用於本土大豆品種青仁烏豆 (Chin-Ren-Woo-Dow, CRWD) 之轉殖平台，因此

針對本研究室建立之轉殖系統進行下胚軸培殖體再生測試、殺草劑 Phosphinothricin (PTT) 濃度篩選及農桿菌轉殖條件測試，並嘗試利用基因槍 (particle bombardment) 系統進行轉殖，希望能建立較完善之大豆轉殖系統。但目前仍未獲得任何大豆轉殖株。轉殖水稻部分，目前已獲得之 28 株 GluGy5VP10 水稻再生植株，經 PCR 確認，皆為轉殖株。經南方墨點法分析轉殖基因套數，大部份水稻轉殖株含有 1 或 2 套插入基因。以西方墨點法分析種子蛋白表現，在接近 60 kDa、50 kDa 、40 kDa、20 kDa 位置之蛋白，皆可被 Gy5、Anti-6X Hi

s tag 抗體所辨識，進一步利用液相層析-串聯質譜儀 (LC-MS/MS) 進行蛋白身分鑑定，在接近 60 kDa、50 kDa、20 kDa 位置之蛋白，可比對到Gy5-10VVYP 或 大豆 Glycinin 5 (Gy5) 蛋白。由以上結果確認 GlyGy5VP10 轉殖水稻種子可表現 Gy5-10VVYP。最後進一步針對水稻外源蛋白 Gy5-10VVYP 進行大量萃取純化，以利後續試驗確認 Gy5-10VVYP 可釋放出 VVYP 胜肽片段，並以動物試驗檢測其是否具有降血脂之功效。

影響大豆農桿菌媒介基因轉殖因子之探討

為了解決CRWD的問題，作者蘇柏昀 這樣論述：

利用基因轉殖技術以植物做為生物反應器，生產具有經濟價值的蛋白質或提高作物營養成分是一具有發展潛力的領域。大豆種子含有大量的蛋白質，約佔種子乾重的40 ％，因此非常適合作為生產異源蛋白的生物反應器。但目前大豆轉殖仍是非常的困難，試驗的再現性差使得實際應用及研究均受限制，如能探討影響轉殖的重要因子，可作為日後發展穩定高效率基因轉殖平台的基礎，將有助於大豆基因體研究及新品種之育成。本研究選用大豆子葉節及胚尖為培植體，建立植株再生系統與不定芽誘導系統。在不定芽誘導試驗中，以不同濃度BA試驗，結果顯示無論在何種濃度BA條件下，子葉節皆無法形成不定芽；而胚尖於BA 0.2 mg/L條件下，有最佳的不定芽

誘導效率(76 ％)。因此以胚尖作為培植體，探討影響農桿菌感染效率的原因，並以報導基因GUS作為評估感染效率的依據。試驗使用CRWD、Jack、William82等三個品種大豆進行與農桿菌EHA105之親合性分析，結果顯示三個品種皆可被農桿菌感染；在不同傷害處理的比較發現，超音波震盪處理有最佳的感染效率，可有效的提升感染的面積與感染的培植體數。共培養的階段添加不同濃度之抗氧化劑L-cysteine (0-800 mg/L)，可減少農桿菌轉殖過程中的褐化現象，濃度提高至200 mg/L時，有最佳的感染率(89.5 ％)，但過高濃度400及800 mg/L時，則會抑制培植體的生長。利用最佳的感染條

件進行轉殖可得到再生擬轉殖植株，但由出瓶的擬轉殖株萃取其葉片基因組DNA進行PCR分析，無法擴增出目標基因與篩選基因片段，表示經由此再生與農桿菌感染系統無法獲得大豆轉基因植株，進一步探討何因素造成芽體於篩選培養基脫逸(escapes)的現象，觀察結果發現可能是由胚軸周圍所增生之癒合組織提供解毒作用，因而使非轉殖之芽體得以生長。本研究亦建立大豆雜交系統作為未來轉殖基因堆疊之依據。

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