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探討不同發酵策略對於Klebsiella sp. Ana-WS5生產1,3-丙二醇與2,3-丁二醇之影響
為了解決jg老師ptt 的問題,作者李芳慈 這樣論述:
探討不同發酵策略對於Klebsiella sp. Ana-WS5生產1,3-丙二醇與2,3-丁二醇之影響研究生:李芳慈指導老師:顏宏偉摘要--本研究為探討利用不同碳源培養Klebsiella sp. Ana-WS5以同時生產2,3-丁二醇(BDO)和1,3-丙二醇(PDO),並嘗試利用不同發酵控制增加BDO與PDO之生產濃度。根據搖瓶批次實驗的結果發現,以甘油 (70 g/L)為單一碳源生產BDO (21.7 g/L)與PDO (10.3 g/L)的效果較佳;以粗甘油 (70 g/L)為單一碳源時,會使菌體濃度下降 (2.2 g/L),但其培養基經發酵後pH均能維持高於5.0,有助於PDO合
成 (14.9 g/L);而以相同濃度的混合碳源 (甘油與葡萄糖,濃度分別為50 g/L、20 g/L)反而會導致BDO (5.9 g/L)與PDO (2.1 g/L)產物濃度下降;先前的文獻指出,培養基中添加醋酸有助於BDO的生產;本實驗研究結果發現添加乳酸具有類似醋酸添加的效果,亦可以提升同時生產的BDO與PDO,並且添加10 g/L的乳酸能有效地提升30 %的Total Diols產量 (30.8 g/L至39.4 g/L)。包埋法固定化細胞培養,凝膠球粒徑較小 (1.3 mm)有助產物的生產;不同凝膠球顆粒數因為pH過低的影響,無明顯的差別;重複批次實驗可以有效的重複三次,BDO和PD
O均能維持約20 g/L、11 g/L;連續式放大培養BDO、PDO生產速率分別是0.27 g/Lh、0.20 g/Lh,產率分別為0.29 g/g、0.54 g/g。細胞固定化對產物的生產沒有特別的提升效果,但有利進行重複批次實驗。不同溶氧量對菌體生長及BDO與PDO生產也有不同影響,高溶氧批次發酵,有助於菌體生長 (2.8 g/L)、提高BDO的濃度 (30.1 g/L)、生產速率 (0.42 g/Lh)、產率 (0.43 g/g);低溶氧批次發酵反而有利於PDO的生產,提升PDO濃度 (17.2 g/L)、生產速率 (0.13 g/Lh)、產率 (0.59 g/g)。固定pH 7.0的策
略,能單獨提升PDO的最大濃度 (25.0 g/L)、生產速率 (0.33 g/Lh)約為控制組 (無pH調整)兩倍之多;雖然在探討固定時間間距調整pH (12 hr、24 hr)之批次策略無法有效提升BDO及PDO之最大濃度,但相對於控制組生產速率方面卻有大幅度的增加,BDO (0.21 g/Lh)、PDO (0.42 g/Lh);固定時間間距調整pH (24 hr)之間隔式饋料批次策略皆在Total Diols的最大濃度 (74.3 g/L)、反應速率 (0.83 g/Lh)有相當的提升,連續式饋料能改善間隔式饋料產物延遲生產的問題,但對產物的生產沒有明顯的影響。氣舉式發酵槽具有較好的溶氧
速率且無機械攪拌葉片之剪切力的產生,相對於攪拌式發酵槽,有利於菌體的生長 (3.0 g/L)與BDO (22.2 g/L)的生產。總結,本次研究結果顯示,以Klebsiella sp. Ana-WS5 生產BDO和PDO對於發酵液中溶氧量、pH的變化、發酵槽型式是相當敏感的,細胞固定化培養則有利於重複批次實驗。此外,乳酸添加、溶氧的改變、固定時間間隔調整pH之饋料批次實驗皆是簡單又有效的方式作為提高BDO和PDO生產的發酵策略。關鍵字:2,3-丁二醇、1,3-丙二醇、乳酸、pH、溶氧量一、緒論1-1 前言當今石化能源涵蓋了生活中的食衣住行,石化能源與現代人類生活已密不可分。人口的急速增加、工業
科技的快速發展導致對石化能源的需求量高度成長。國際能源情勢方面,於二十一世紀中石油、天然氣、煤炭等石化燃料即將枯竭,但人類的需求量仍然持續增加,因此價格也不斷攀升。而高度依賴石化能源,對地球環境也帶來極大影響,例如溫室效應、全球暖化、海平面上升等,因此開發替代再生能源將成為全球關注的議題之一。全球石化燃料的日益短缺、價格飆漲,受限於此天然資源的問題,非石化原料來源的綠色化學品,將是未來重要的化學品來源。因此利用微生物發酵法生產化學品已逐漸引起關注。1-2 研究動機本研究所使用的菌株Klebsiella sp. Ana-WS5為能同時生產2,3-丁二醇(BDO)和1,3-丙二醇(PDO),故利用
不同的碳源與不同的發酵策略對於產物BDO與PDO的分布進行一連串的研究,所使用的發酵策略有(1)溶氧、(2)固定pH、(3)固定時間間距調整pH。另外,文獻指出於培養基中添加醋酸、乙醇能有效提升產物產量,本研究則為添加亦為副產物的乳酸,以觀察其對產物的影響。為了有效地重複使用微生物細胞,利用載體為海藻酸鈉之包埋法進行細胞固定化,並探討不同固定化條件對於產物生產的影響。二、文獻回顧2-1 BDO介紹BDO的開發起始於1906年,由Harden和Walpole首次利用微生物轉換法以Klebsiella pneumonia生產 (Harden and Walpole, 1906)。如今石化燃料的短
缺,石油價格不斷的上升,以微生物發酵法生產BDO再次受到重視。BDO,C4H10O2,分子量90.12,無色結晶固體或黏稠液體,溶點23~27 ℃,沸點179~182 ℃,密度為1.05 g/cm3,燃燒值為27198 J/g,能溶於水、醇和醚類。BDO應用相當廣泛,應用範圍有燃料、化工、食品、燃料、醫學、交通等多種領域中。例如BDO具有高燃燒值,是一種極具價值的液體燃料可以作為航空燃料;具有較低凝固點的特性可用作抗凍劑。另外,也可以應用於化妝品、香水、藥物載體、染料、印刷油墨、炸藥等 (Garg and Jain, 1995;Syu, 2001)。目前的生產BDO主要分為兩種方法,一是化學合
成法,但化學合成法有其缺點為必須在高溫高壓高單價觸媒的環境下進行合成,成本較高,又因BDO結較為複雜,相對的困難度也會提升。而用微生物發酵法來生產BDO,其優點為操作會比較簡單,且可以利用工業廢料當成營養源,成本也會降低,亦符合現在所提倡的綠色化工,所以微生物發酵法是現在生產BDO較受歡迎的方法 (Wong et al., 2012)。2-2 PDO介紹 PDO是已知最古老的發酵產物之一,它早在1881年由August Freund以Clostridium pasteurianum加入含有甘油的混合培養基發酵生產而得的中間體化合物,一種可直接利用微生物轉化合成之非石化來源之綠色化學品 (B
iebl et al., 1998;Reimann et al., 1998)。PDO,分子式C3H8O2,分子量76.09 ,無色或淡黃色的黏稠液體,略有刺激的味道,溶點-32 ℃,沸點214 ℃,密度為1.053 g/cm3,與水、乙醇、丙酮等多種溶劑互溶。PDO具有良好生物降解性,且不具毒性,是一種重要化工和醫藥中間體原料,可廣泛應用於多種不同產業領域,如高分子、化妝品、食品與醫藥等產業。同時PDO,更是合成新型聚酯—聚對苯二甲酸丙二酯(PTT)的主要單體之一,如圖2-3,PTT具有許多獨特的性質,因此受到國際的廣泛重視 (Biebl et al., 1999;Kurian, 2005)
。生產PDO目前有兩種方法,分別為化學合成法和微生物發酵法。化學合成法,缺點是副產物多、選擇性差、操作條件需高溫高壓、所利用的化學原料均為不可再生的石油或煤碳資源;而微生物發酵法,選擇性高、操作條件溫和、原料可用再生的農產品或工業廢料粗甘油等符合可持續發展的需求,所以越來越受重視。2-3 BDO與PDO代謝路徑圖一為微生物發酵的代謝路徑圖。由圖可發現以甘油為碳源時,代謝產物包含PDO、BDO、乙醇、醋酸、乳酸、琥珀酸,其中PDO通常是甘油發酵的主要產物。研究指出,利用Klebsiella sp.進行甘油發酵的期間,隨著pH減少醋酸的形成會被BDO形成所取代,使得BDO也成為較為主要的產物之一
。圖2-1 產物代謝路徑圖2-4 細胞固定化介紹微生物固定化技術使利用物理或化學程序將微生物定位於特定空間區域中,並使其保持活性,可維持較高的菌體濃度及加快生產速度 (Idris et al., 2006)。具有反應速度快、不易受汙染、產物分離容易、穩定性高、可重複利用等優點。依照固定載體和作用方式不同可分為五種類型:吸附法、交聯法、包埋法、包覆法、共價鍵結法。微生物最常用的方法為包埋法,是將微生物置於天然高分子多醣類或高分子凝膠中,使微生物固定化。其優點有成型方便、對細胞活性影響小、可以製作成各種形狀等 (Sun, 1998)。載體材料的選擇對微生物固定化發酵也是非常重要的因素,理想的固定
化載體應該為穩定性高、對微生物無毒性、質傳性能良好、不易被微生物分解、機械強度高、使用壽命長、價格低廉等。目前,微生物發酵最常使用的固定化包埋法使用的載體材料有瓊脂、海藻酸鈉、聚乙烯醇、聚丙烯醯氨、聚乙烯乙二醇、具丙烯酸等凝膠。其中,海藻酸鈉是由褐藻提取的多醣,故其價格低廉、生物相容性良好且固化、成型方便,是目前使用最廣、研究最多的固定化載體。2-5 影響BDO、PDO產量因素(1) 溶氧量發酵液中的溶氧濃度對微生物的生長和產物BDO、PDO的形成有著重要的影響。在發酵過程中,菌體必須要有適當的無菌空氣才能繁殖和累積代謝物,不同菌種生長、不同代謝路徑所需要的溶氧量都是不相同的,所以研究反應
器內溶氧量對發酵的影響及對代謝產物生產效率、產量是非常重要(Zhang et al., 2007)。Klebsieblla sp.為兼性厭氧菌,由上述可知在好氧和厭氧條件下分別利用兩種不同的途徑代謝甘油能分別得到其主要的代謝產物,在好氧的條件下,甘油代謝由3-磷酸甘油操縱子 (glp)調控;甘油在依賴ATP的甘油激酶催化下磷酸化,生成3-磷酸甘油,3-磷酸甘油在甘油脫氫酶作用下轉化為磷酸二羟丙酮進入酵解途徑,進而生成BDO;在厭氧條件下,甘油的代謝主要由二羟丙酮 (dha)調控,分別為氧化和還原兩條途徑,在氧化途徑,甘油在依賴NAD+的脫氫酶的催化下脫氫轉變為二羟丙酮,二羟丙酮在二羟丙酮激酶的
作用下磷酸化為磷酸二羟丙酮,進而進入酵解途徑生成BDO、乳酸、甲酸、乙醇等代謝副產物。在還原路徑中甘油則是以在甘油脫水酶的作用下轉變為甘油3-羥基丙醛,然後利用氧化還原途徑生產的NADH,在依賴於NADH的1,3¬-PDO-NAD氧化還原酶的作用下生成PDO。GDHt是催化甘油轉化生成PDO代谢途徑中的關键限速酶,因此,後續將可以使用GDHt之酶活性監測不同發酵策略對PDO合成的影響(Wong et al., 2011)。(2) pH發酵液的pH值對BDO、PDO生成途徑的影響作用是非常大的。這是因為BDO生產是一個多副產物的途徑,每種副產物生成途徑的相關酵素最適合的pH並不一致,因此發酵過
成中pH不僅會影響細菌的生長還會影響細菌的代謝過程。微生物以甘油為碳源發酵生產PDO的過程中,經由pH的控制策略可以有效的增加甘油的轉化率和控制副產物生產。目前PDO的發酵生產主要都採用間歇性的發酵過程,隨著甘油濃度的降低及產物PDO的累積,使菌體的生長速度逐漸緩慢,產生嚴重的產物抑制效應 (Ji et al.,2007)。所以可以利用發酵過程中pH的波動加上分批饋料的方式,因為發酵過程中當PDO逐漸增加時,菌體生長的環境也隨著改變,以至於菌體的生長速率下降,使副產物的產量隨之增加,所以將pH維持於中性可以維持菌體的生長速率,也可以降低副產物的大量產生。所以運用此策略可以提高PDO的最終濃度、
提高甘油的轉化率、抑制副產物的生產。無控制pH值的發酵過程中24小時內的pH值自然地快速下降至低點,此過程pH值差約3.5~4.0,此pH的快速下降是由於BDO和酸類的生成。強迫pH值的波動之方法是利用固定時間間距調整pH值,然而發酵液會自發性的降回低點,使發酵過程中能模仿自然發酵中的pH值變化,pH值能於明確的時間間距中不斷震盪。此新方法可以有效的提升BDO和PDO的生產及增加甘油的利用率(Petrov et al., 2010)。本實驗將於固定時間間距 (12 hr、24 hr)將pH值調整至7.0以觀察BDO和PDO之生產變化。(3) 添加醋酸、乙醇的影響文獻曾提出在發酵液中添加醋酸、
乙醇可以有效的提升甘油的利用率和BDO產量的提升,由圖2-1的甘油代謝路徑圖可以發現甘油經由甘油脫氫酶催化作用後可以代謝出BDO、琥珀酸、乳酸、醋酸、乙醇等代謝產物,因此在發酵液中各別添加副產物少量醋酸、乙醇,發現能在甘油代謝過程中產生產物抑制效應,使碳流減少利用於生產此兩種副產物,進而有效利用於BDO的生產 (Zeng e tal., 1990)。本次實驗也是利用此原理,在發酵液中添加亦為副產物的乳酸並測試添加不同濃度的乳酸對BDO與PDO生產的影響。三、材料與方法3-1 實驗材料3-1-1 實驗菌種本實驗所採用的菌株Klebsiella sp. Ana-WS5,具有發酵生產二醇類的能力,
由國立成功大學化工系張嘉修教授所提供。此菌株篩選於國立成功大學實驗所高效率生物消化系統中的污泥,經利用16S rRNA基因序列(圖3.1)與Genbank鑑定後確定菌株種類為Klebsiebllasp.,並命名為Klebsieblla sp. Ana-WS5。圖3-1 Klebsiella sp. Ana-WS53-2 實驗架構圖3-2 實驗架構Ⅰ (懸浮培養)圖3-3 實驗架構Ⅱ (固定化培養)四、結果與討論4-1 搖瓶批次發酵程序(Flask Experiments)4-1-1 不同碳源之影響此實驗為探討不同碳源對於菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-1得知,菌體濃度以甘油為碳源時
最高,約2.3 g/L。BDO以葡萄糖為碳源時產量最高,PDO、Total Diols以甘油為碳源時最高,由於甘油能同時生產BDO與PDO,而葡萄糖主要為生產BDO。以甘油當作碳源,能得到較高的菌體濃度且由代謝路徑可知利用不同發酵策略能分別生產較高BDO與PDO。且由於現今生質柴油產量日益增加,其副產物粗甘油也大量的生產,未來以粗甘油為替代碳源將可以降低生產成本。因此,選定甘油當作後續培養所使用的碳源。圖4-1 不同碳源對菌體生長及產物產量之影響4-1-2 添加不同乳酸濃度之影響文獻指出,當以Klebsiellasp.生產BDO時,若在培養基中添加少許的代謝副產物醋酸或乙醇,會使BDO的產量有
所提升。所以本次實驗為探討添加亦是代謝副產物的乳酸在不同濃度下對菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-2可知,效果以添加10 g/L為最好,較控制組高出30%,其BDO、PDO、Total Diols分別為26.3 g/L、10.8 g/L、37.1 g/L。此結果由圖2-1甘油代謝路徑推測當培養基中添加乳酸,由於產物濃度效應而使甘油代謝路徑向BDO,故提高BDO的產量。圖4-2 添加不同濃度的乳酸對菌體生長及BDO與PDO產量之影響4-1-3 細胞固定化之重複批次實驗本次實驗探討以海藻酸鈉為固定化載體的固定化細胞進行Repeated-Batch實驗對BDO與PDO產量之影響,每一次批次
以96小時為一個循環。由圖4-3所示,固定化細胞在第一批次到第三批次發酵實驗中,雖然主要代謝產物的產量有略微的下降,但BDO和PDO的產量分別都可以維持在20 g/L、11 g/L左右。但在第四批次實驗,凝膠球會開始破裂使菌體流出凝膠球外,推測凝膠球破裂後浸泡於培養基中,造成培養基的改變加上菌體的活性降低,導致主要代謝產物的產量下降。圖4-3 細胞固定化之重複批次實驗對BDO與PDO產量之影響4-2 5-L攪拌式發酵槽批次程序 (Batch)4-2-1 控制溶氧量之影響溶氧量高低會影響菌體的生長與甘油代謝路徑,本次實驗控制溶氧量於高DO值(70 ± 10%)與低DO值(10 ± 10%)之批
次發酵策略,來探討不同的溶氧發酵策略對菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-4所示,在高溶氧策略下,細胞能快速生長並得到較高的菌體濃度2.7 g/L而低溶氧時的菌體濃度僅達1.7 g/L且在主要代謝產物BDO方面,高溶氧發酵和控制組的最大濃度幾乎相同約30.3 g/L,但其BDO的生產速率為0.42 g/Lh遠大於控制組的0.16 g/Lh,約2.6倍之多;於PDO方面,反而於低溶氧的狀態下是較有利於Klebsiella sp.生產PDO,因為其PDO生產速率可達0.27g/Lh是控制組0.12 g/Lh的兩倍左右。由表4-29可發現,由高低溶氧的發酵策略可以使同時生產PDO和BDO的K
lebsiella sp.對生產其中的某一產物選擇性較大,提高其中一個產物的生產量同時降低另一個代謝產物的生產,更有助於後續分離純化的步驟。圖4-4 控制溶氧量之比較4-2-2 固定pH值之影響文獻指出pH值控制於6.0~7.0是較適合Klebsiella sp.生長(Jiet al., 2011)。因此本次實驗分別將pH值控制於6.0、7.0,探討不同的pH值發酵策略對於菌體生長及BDO與PDO產量之影響,由圖4-5可發現,將pH固定於6.0、7.0時,菌體濃度最高為pH固定於7.0。固定pH會使PDO的產量和生產速率明顯的提升。當發酵過程中pH均固定於7.0時,PDO的最大濃度與生產速率能
提升至25.0 g/L、0.33g/Lh;但在BDO方面固定pH值之發酵策略無法對產量或生產速率有所幫助。雖然此方法不利於BDO的生產,但對於菌體生長和PDO生產方面卻是有不錯的進展。圖4-5 固定pH之比較4-2-3 固定時間間距調整pH之批次發酵實驗本次實驗將仿效控制組pH自然快速下降的變化來測試產物產量和生產速率的影響。培養並利用5N NaOH在固定時間間距分別為12小時和24小時調整槽內發酵液的pH值,調整為7.0,直到pH不再下降至7.0以下。由圖4-6可以發現,當pH被調整為7.0之後12小時之內即又下降,所以此方法可以有效地強迫pH產生震盪變化。實驗結果如圖4-28所示,此強迫p
H來回震盪的方法確實可以提升BDO的生產速率,但依舊無法提高BDO的產量,推測是因為碳源甘油快速地被消耗,以至於產量無法繼續提升;PDO方面,此方法跟固定pH值一樣有利於PDO的生產,甚至效果更好。比較兩種不同時間間距所得到的數據,在主要代謝產物方面,以24小時調整一次的效果比12小時調整一次較佳,因為pH值12小時內掉回5.0以下,在pH維持 5.0以下的時間會長達12小時,此環境是有利於BDO的生長,所以BDO的產量會較好。因此pH的強迫震盪是可以有效刺激BDO、PDO,提升生產速率,而不同的pH環境,更可以提升各別的產量。圖4-6 固定時間間距調整pH之比較4-3 5-L攪拌式發酵槽饋
料批次程序 (Fed-batch)4-3-1 固定時間間距調整pH之饋料批次發酵實驗由4-2-3批次實驗得到每24小時調整pH至7.0可有效的提升BDO、PDO的生產速率,但因為碳源在96小時內快速消耗,以致無法持續提升BDO的產量。因此本實驗以每24小時調整pH值之間隔式饋料批次發酵策略來改善主要代謝產物產量不佳的問題。但間隔式饋料是具有產物延遲累積的問題,並用連續式饋料作為改善。由圖4-30可會發現連續式饋料確實可改善產物延遲累積的問題,且饋料批次也能以提升主要代謝產物產量,BDO的最大濃度由14.3 g/L 增加至20 g/L,PDO也更從30.1 g/L提升至54.8 g/L。。圖4-
7 饋料批次之比較五、結論由搖瓶實驗可知,甘油可以提高菌體濃度且得到較好的Total Diols。在培養基中添加乳酸能有效提升Total Diols約30 %。而包埋法之固定化細胞重複批次實驗可以重複四次批次實驗,前三次批次BDO和PDO都可以維持在20 g/L、11 g/L;第四次批次凝膠球則會破裂。細胞固定化對產物的生產沒有提升效果但有利進行微生物細胞重複利用。5-L攪拌式發酵槽批次發酵之溶氧實驗中,高溶氧,可以獲得細胞較高的菌數量2.8 g/L、提高BDO的最大濃度30.1 g/L、生產速率0.42 g/Lh、產率0.43 g/g;低溶氧批次發酵反而有利於PDO的生產,最大濃度17.2
g/L、生產速率0.13 g/Lh、產率0.59 g/g;固定pH實驗,以pH值控制於7.0時可得較高的菌體濃度2.8 g/L、PDO的產量和生產速率明顯的提升至25.0 g/L、0.33g/Lh;固定時間間距調整pH至7.0實驗,以每24小時調整pH值至7.0相對於固定pH 7.0可有效提升BDO的生產速率(由0.13提升至0.20 g/Lh),此方法跟固定pH值一樣有利於PDO的生產,甚至效果更好。5-L攪拌式發酵槽饋料批次發酵之固定時間間距調整pH至7.0實驗,強迫性的pH震盪有助菌體的活性,發酵液中pH的改變也可以改變甘油的代謝路徑進而提高BDO、PDO生長速率 (0.20 g/Lh、
0.42 g/Lh),之後再利用饋料的方式,來促進BDO、PDO (20.0 g/L、54.8 g/L)產量;而兩種不同的饋料方式,差別僅於連續式饋料批次可以改善間隔式饋料批次時產物延遲生產的問題,對產物的產量並無明顯影響。參考文獻Biebl H., Zeng A.P., Menzel K., Deckwer W.D., (1998). Fermentation of glycerol to 1,3-propanediol and 2,3-butanediol byKlebsiella pneumonia. ApplMicrobiolBiotechnol, 50:24-29.Biebl H.,
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#9.活靈活現黃老師ptt在PTT/Dcard完整相關資訊 - 小文青生活
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#10.jg說真的在PTT/Dcard完整相關資訊
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#11.Jg 課程; 斯巴達克斯成人版
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#12.[其他] 很久以前的JG - Stock
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#13.jg說真的是誰在PTT/Dcard完整相關資訊
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#14.【請益】 高手的技術分析絕招,若被公開會失效嗎? - 股市板
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#15.石頭人jg - Iaf25
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#16.Jg 課程// 中級日本語改訂版ii
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#17.[請益] JG說,現在氛圍像2008崩盤前夕 - PTT評價
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#18.高中生也瘋買股!他驚訝「時代變了」 網讚 - Altis 油電
全台上櫃股票資訊網,NANA說美股PTT,股市達人PTT,M觀點PTT,allen葛格ptt,JG ... 之後有很多XX老師版上的+~老師小弟也略 常見股票youtuber推薦ptt問答美股課程PTT啾啾 ... 於 autoescuelalaureano.es -
#19.『文广传媒』墨西哥墨西哥自治理工大学毕业证办理
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#20.當時在PTT有一個傳說中的神人,他很擅長用波浪理論預測股價 ...
通過JG說真的 專職&操盤階梯 最新文章 ... 2005年末我剛進股票市場,當時在PTT有一個傳說中的神人,他很擅長用波浪理論預測股價的波動。舉凡幾塊會止跌、支撐在哪裡、 ... 於 www.jgtruestock.com.tw -
#21.【從零開始01】追突破?看爆量?你相信支撐壓力嗎? - YouTube
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#22.專業投機原理ptt – 投機的意思 - Rivero
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#23.反市場jg股市操作原理ptt - 投資貼文懶人包
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#24.Re: [問卦] 有沒有股市51區的八卦? getlonely PTT批踢踢實業坊
不知道為什麼覺得這篇好像是廣告文... 目的是用來宣傳fb上的社團 1 3/28 XXaa □ [請益] 關於剛剛JG老師的大會師(Stock) 2 3/31 XXaa □ [請益] 股板有LINE群組可以 ... 於 www.ucptt.com -
#25.jg說真的在PTT/Dcard完整相關資訊 - 萌寵公園
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#26.PTT認證「正妹數學老師」近況曝光!辭職推咖啡…5天募到26 ...
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#27.Jg 說真的 - Piemontecontributi
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#29.反市場jg股市操作原理ptt的推薦與評價
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#30.玩股半年賺2億!PTT土豪哥曝「選股進場關鍵」 眾狂朝聖
PTT 土豪哥「金庸」先前因在八卦板上分享了自己人生,因此受到大眾關注。對此,有在投資股票的他,就在私人閒聊股市社團上分享了自己投資手法, ... 於 tw.stock.yahoo.com -
#31.【反市場JG股市操作原理】 面對全球最大的賭場 - 思維致富
今天要介紹的是《反市場—JG股市操作原理》,作者JG老師以有別於大眾對股市的看法,來闡述他多年來的成功操作哲學,就讓我們一同進入他的股市價值觀吧~ 於 thethinkingoftherich.com -
#32.Jg 說真的評價
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#33.『宜春新闻网』办假英国伦敦大学伯克贝克学院文凭多少钱
在降成本方rb Nk,2017年规模以上工tS dF企业每百元vx Y6营业务收入jG 87 ... 不同于之前的PTT的展示,公诉人边念边用手07 Nw自己面前的触屏上边划Y4 ... 於 m.chongwu.hk -
#34.反市場jg 股市操作原理
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#35.[請益] 請問股市前輩JG? - 看板Stock - PTT網頁版
... 股票的教學人好像很實在,講真的爬文好像在ptt股版很久以前常出來請問版友們對JG 這位股市前輩的想法? ... 只有嘉偉老師唯一嘉偉老師其他洗洗睡. 於 www.pttweb.cc -
#36.jg說真的課程在PTT/Dcard完整相關資訊 - 星星公主
Google Play一說就中! ... 擅長結合心理學與實戰技巧,多年來透過線上文字與線下實體課程、 個別諮詢等方式,已幫助... YouTube熱門頻道《JG說真的》創辦人JG老師,. 於 astrologysvcs.com -
#37.Jg 說真的 - Sportechnology
白鞋清潔ptt. ... 我是一位獨立於媒體的專職操盤人,大家叫我JG。 ... YouTube熱門頻道《JG說真的》創辦人JG老師,綜合自己專職操作生涯,以及訓練了 ... 於 sportechnology.ru -
#38.反市場:JG股市操作原理 - 博客來
書名:反市場:JG股市操作原理,語言:繁體中文,ISBN:9789864777662, ... 這輩子打卡上班只有當補習班老師的第一年,進入股市用20 萬賺到將近400 萬後,就此離開看 ... 於 www.books.com.tw -
#39.「jg老師ptt」+1 [其他] youtube網紅JX唬爛說有賺一倍的學生?
「jg老師ptt」+1。最近有個JX老師在Youtube頻道蠻紅的而且有點秋常下指導棋給很多"...推hellogym:JG就ptt股版出來的啊人家是給你釣竿教你釣魚12/2722:34.,之前看過大大 ... 於 pharmknow.com -
#40.[請益] 真的有人親眼看過JG的對帳單嗎? - Stock - PTT網頁版
[請益] 真的有人親眼看過JG的對帳單嗎? 作者, PrettyOdd ... 27樓 → GalacticEcho: 戰場,信錯老師死的就是自己,可不像打電動能讀檔 06/14 08:18. 於 ptt-web.com -
#41.[問題] 今天及成為什麼跌這麼深?? - 精華區Stock - 批踢踢實業坊
我一個朋友常看空大盤,我問他原因,他回我因為他老師看空,而且他老師很準,我 ... 為主技術面為輔的威力-- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◇ From: 220.137.99.74. 於 ptt.healtyman.xyz -
#42.Re: [心得] JG的爆賺理論- Stock板
: 是用何種技術分析模型? --. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自 ... 於 disp.cc -
#43.Re: [請益] 真的有人親眼看過JG的對帳單嗎? | PTT 問答
10 F 推stock999: JG的操作邏輯是對的。 06/14 10:19 ... 27 F →semicoma: 自己的思考自己判斷這些老師能不能跟或者他們對 06/14 11:24. 於 pttqa.com -
#44.Re: [心得] JG的爆賺理論- stock | PTT職涯區
36 F 推pencilx4: 酸JG的很多都曝露自己包尿布般的期待 02/08 12:32 ... 94 F →doranako: 出場,你這週買老師下週說不定換倉了,跟他要有一 02/08 21:40. 於 pttcareer.com -
#45.踢爆投資老師的假面!花好幾萬上投資課,為什麼老師都賺錢
股市是一個奇妙的地方,而股市名師更是一個奇妙的存在。 從小到大我們一路都在學習,參與許多老師的課程,但不論是哪一類的課程,都有一個明顯的共通 ... 於 wealth.businessweekly.com.tw -
#46.反市场jg pdf下载# office 網頁版ptt
YouTube熱門頻道《JG說真的》創辦人JG老師 ...反市場:JG股市作原理. 作者:JG. 出版社:商周出版. 出版日期:2019/12/12. 语言:繁体中文. ISN: ... 於 fuujm.edition-eltern.com -
#47.jg老師ptt - 軟體兄弟
jg老師ptt,個人認為成交量對於操作是很重要的參數: 另外請問有人知道JG的操作心法跟... 不是都在當老師嗎05/01 1 2: : 24 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), ... 於 softwarebrother.com -
#48.JG 說真的
這次國安基金的動作會讓JG老師有更多加碼放空的機會,因為經濟可能衰退與戰爭的不穩定 ... 今天小編在刷PTT的時候有種熟悉的感覺慢慢浮現,雖然已經台股也跟著跌了大 ... 於 www.facebook.com -
#49.得到APP - 知识就是力量,知识就在得到
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#50.[其他] JG 說真的有人知道嗎?? | jg入門集訓ptt
jg 入門集訓ptt,你想知道的解答。有人專職也是以JG為 ... 專職一點都不無聊,還挺忙的--※發信站:批踢踢實業坊(ptt.cc),來自:2. ... [心得] 某J老師的課| jg入門集訓ptt. 於 investwikitw.com -
#51.200%或是20% JG的操盤手筆記
一樣的技術,可以賺200%也可以賺20%,關鍵只在人生的規劃、致富的勇氣以及大膽作決定. 2019年7月25日星期四. › 公告: JG部落格移轉至新官網: ... 於 jgdady.blogspot.com -
#52.反市场:JG股市操作原理
反市场: JG 股市操作原理, 视频播放量21901、弹幕量49、点赞数347、投硬币枚数85、收藏人数935、转发人数182, 视频作者WithEric, 作者简介, ... 於 www.bilibili.com -
#53.與眾不同的思考<反市場:JG股市操作原理>- 讀後心得 - Medium
JG 訪問了一些骨灰及玩家和蠻有名的投資者,儘管價值觀不同也幫他推薦(如PTT的 ... 股市的書滿滿滿,每個老師都說著自己的一套方法,沒有錯,同一套邏輯用於不同人身上 ... 於 medium.com -
#54.Jg 說真的評價 - 水瓶座桌遊博客來
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#55.Jg 說真的
【JG說真的YouTube熱門頻道《JG說真的》創辦人JG老師,綜合自己專職操作 ... 罗(二),反市场:JG股市操作原理,JG说真的今天小編在刷PTT的時候有種 ... 於 terra-nostra.cat -
#56.Jg 說真的# 手機模擬器ios mac
YouTube熱門頻道《JG說真的》創辦人JG老師, 綜合自己專職操作生涯,以及訓練了 ... 說真的是誰相關PTT/Dcard文章,想要了解更多jg說真的、jg說真的8原則、jg說真的 ... 於 nonseisolo.eu -
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#58.補習班老師只花一年,把20萬翻成400萬!他操盤10多年悟出
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#59.[心得] JG的爆賺理論- 看板Stock - 批踢踢實業坊
看過JG的爆賺策略,(買對,下大,抱住),覺得很厲害,買進後是靠設定的策略紀律賺錢,但一直好奇的是, ... 那老師就會跟你說你買錯了 02/08 09:36. 於 www.ptt.cc -
#60.Re: [請益] 靠投資財務自由的人的方法 - PTT Uncovered
JG老師 有說股市就像賭場選好然後重壓才會暴賺! 三小定存股都是替自已的懶墮找理由懶得找公司懶得做研究買個大家都推的定存明牌,賺大概的錢,你的人生就是大概不會 ... 於 www.plytic.com -
#61.jg老師、JG的評價、jg說真的評價在PTT/mobile01評價與討論
在jg老師這個討論中,有超過5篇Ptt貼文,作者scott91620也提到請詳述以下資訊: 一、性別:男二、年齡:34 三、職業/工作內容:工程師四、保障需求:癌症、實支實付、 ... 於 yoga.reviewiki.com -
#62.[請益] JG的課值得上嗎? - Stock - PTT情感投資事業版
想問問看版友的意見請問JG的課程值得花錢去上嗎? ... 值得花個學費嗎~ 謝謝-- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 117.19.162.38 ※ 文章網址: ... 於 ptt-chat.com -
#63.[問題] 遊戲中侮辱指名為我方JG - 英雄聯盟
[問題] 遊戲中侮辱指名為我方JG. 看板 Lol. 作者 hanknine ... 6 F 噓YumeJhe: 小學生吵架吵輸跑去找老師同樣道理 01/10 13:44. 於 pttgame.com -
#64.媽寶ptt
發信站: 批踢踢實業坊ptt.2020 · 直到最近PTT 媽寶板強推的LEGEE-688 雷姬掃拖機器人 ... 才可以順利拿下主堡有夠誇張的戰神媽寶-- 標題問題AD提摩JG 殞落要出黑切嗎? 於 lix.eiscafe-venezia.eu -
#65.JG股市操作原理就是要「反市場」:大賺小賠是真的可以?不 ...
YouTube熱門頻道《JG說真的》創辦人JG老師,綜合自己專職操作生涯,以及訓練了無數學生的經驗總和,帶領你跳脫市場上的迷思,不必預測股價、不用 ... 於 www.tatlerasia.com -
#66.[其他] JG 說真的有人知道嗎?? - 看板Stock | PTT職涯區
有人專職也是以JG為目標嗎?? 至於課程要二萬多塊… ... 專職一點都不無聊,還挺忙的-- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), ... 存股老師都在賺你各位的錢. 於 pttcareers.com