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國立中興大學 化學工程學系所 林松池所指導 康博勝的 果醣基胺基酸氧化酶內含體復性之研究 （2018），提出triton x 100稀釋關鍵因素是什麼，來自於內含體、復性、果醣基胺基酸氧化酶、糖化血色素。
而第二篇論文國立臺東大學 生命科學系碩士班 林志輝所指導 陳順達的 以 Escherichia coli BL21 (DE3) 生產重組 Anoxybacillus flavithermus HY-TTH-D23 熱穩定α-半乳糖苷酶與純化之研究 （2018），提出因為有 α-半乳糖苷酶、E. coli BL21 (DE3)、包涵體、柱上復性的重點而找出了 triton x 100稀釋的解答。
果醣基胺基酸氧化酶內含體復性之研究
為了解決triton x 100稀釋 的問題，作者康博勝 這樣論述：
本研究透過大腸桿菌大量生產果糖基氨基酸氧化酶，然而大部分皆形成不可溶且不具活性之內含體(inclusion bodies)，為了從內含體中將失活的蛋白質復性，因此以尿素溶劑對內含體進行溶解並進行。 我們以不同濃度尿素、溶解溫度對內含體進行變性，並透過直接稀釋法比較尿素濃度對總蛋白回收率的影響，最終以5M Urea 100mM phosphate, pH=8.0於4°C下作為內含體溶解系統主軸；在復性程序為了避免蛋白質在重摺疊過程中因為聚集現象降低蛋白質回收率，因此我們將探討復性環境pH值以及不同添加劑對復性效率的影響，最終以100mM Tris pH=9.0作為本研究復性緩衝液，可得蛋白質
回收率為57.12%，並發現復性緩衝液中伴隨0.8M精胺酸、40%甘油、1%曲拉通X-100(Triton X-100)三種添加劑時，對蛋白質回收率有效的提升，其中又以40%甘油獲得90.92%可溶蛋白質回收率為最佳。另外比較不同添加劑組合，發現以0.8M精胺酸及40%甘油共存於緩衝液中，可獲得最佳可溶蛋白質回收率達93.04%，然而曲拉通X-100與其他添加劑之組合對於復性效率的提升有限。
以 Escherichia coli BL21 (DE3) 生產重組 Anoxybacillus flavithermus HY-TTH-D23 熱穩定α-半乳糖苷酶與純化之研究
為了解決triton x 100稀釋 的問題，作者陳順達 這樣論述：
α-galactosidase 具有食品、製糖、飼料、造紙與醫藥應用價值。本研究由嗜熱性溫泉菌 Anoxybacillus flavithermus HY-TTH-D23 選殖出具熱穩定性之 α-galactosidase (rAFGAL) 並進行異源表現與特性探討。rAFGAL-GFP 的分子量為 112 kDa，為目前文獻中第一個從 Anoxybacillus spp. 中選殖並異源表現生產的 α-galactosidase。研究結果顯示 E. coli BL21 (DE3) pET GFP rAFGAL生產的 rAFGAL-GFP 同時以包涵體及可溶性蛋白的形式存在。包涵體占總 rAF
GAL-GFP 產量的 95% 以上，降低培養溫度雖無法有效提升可溶性rAFGAL-GFP 比例，但可提升總活性與比活性。包涵體雖能透過稀釋法與柱上復性法成功生產出具有活性的 rAFGAL-GFP，但其效率太低可能不適合做為 rAFGAL-GFP 大量生產的策略。研究結果顯示，在不添加葡萄糖與 IPTG 的條件下以 37°Ϲ 培養 12 小時，搭配添加 1% Trion X-100 的超音波破菌與 50°Ϲ熱處理的純化方式具單位時間最高產量 (總活性 53.13 ± 8.39 U/L、比活性 11.18 ± 1.33 U/mg，生產成本約 2.62 NTD/U)。相較於前人研究，以本研究開發之
生產條件最高約可降低 50% 之生產成本。本研究生產所得 rAFGAL-GFP 最適作用溫度為 45 與 55ºC，最適 pH 值為 7-10。對於蜜二糖、棉子糖與水蘇糖皆具有催化活性且對蜜二糖具有較高的專一性 (kcat/Km = 245.20/ mM•s)。研究結果除了希望能對 Anoxybacillus spp. 的 α-galactosidase 基本特性有所描述與貢獻外，未來還能將其應用在食品、飼料與造紙等高溫工業製程。