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發展應用轉錄介導等溫擴增之金奈米粒子探針比色分析用於檢測新冠病毒(SARS-CoV-2)變異株

為了解決分鐘縮寫mins的問題，作者黃亭瑋 這樣論述：

自2019年底在中國發現首例病毒性肺炎(COVID-19)，此一由新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)引發的疫情迅速蔓延至世界各國。隨著疫苗的快速發展與接種，疫情曾一度趨緩，但具高感染力與免疫逃脫之新病毒變異株形成優勢株後，致使疫情難以控制。因此各國防疫政策逐漸轉移關注高風險病毒變異株(variants of concern, VOC)。目前WHO公告檢測病毒變異株之標準方法為基於PCR方法並進行病毒基因定序確認。雖具有高靈敏度與專一性，然而全程時間冗長、成本高且需耗人力操作，不利於大量篩檢或邊境管制應用，故發展靈敏、快速且簡易操作，並同時可確認變異株之病毒篩檢技術，不僅具防疫實質需求，對於

防疫政策與疫苗發展方向之制訂亦非常重要。由於Delta和Omicron為疫情當下仍受關注之VOC，因此本研究優先發展這兩個變異株之檢測方法。病毒RNA中，對應合成棘蛋白(spike protein)的S gene是SARS-CoV-2感染細胞重要片段，亦為病毒主要變異區段。本研究先自NCBI資料庫蒐集病毒標準株序列(編號: MW059036)，以比對WHO公告之變種病毒胺基酸變異位點對應之鹼基序列，搜尋目標片段並用以設計擴增引子與可辨識變種病毒之特異探針，後者修飾金奈米粒子為標誌分子；實驗結果顯示，加入對應104 copies/μl Omicron感染細胞純化之 RNA，可於41℃單一溫度1小

時內轉錄擴增 (transcription-mediated amplification, TMA)對應病毒設計之N gene、S gene (D614G、Omicron-specific)三個目標片段，其中N gene與Omicron-specific片段成功擴增，D614G產物量不明顯。上述片段應用本實驗設計之N gene、D614G、Delta-specific和Omicron-specific這4組探針後續進行比色分析驗證。在應用合成目標模板之側流分析法進行前測試結果，可目視檢測極限為50 fmol，目標濃度於1-500 fmol間呈現良好線性關係。於變異株TMA擴增產物分別加入探針辨

識之比色與UV光譜分析結果，靈敏度約為1fmol，約對應108 copies/μL病毒量，全程檢測時間於核酸純化後30分鐘可完成，對於測試之變異株具專一性。總整研究結果，我們成功建立TMA恆溫擴增新冠病毒片段，藉由(變異株特異)金奈米粒子探針辨識聚集產生之顏色差異進行擴增產物比色分析，此法不僅可檢測並同時區辨SARS-CoV-2之Delta和Omicron變異株。

電紡奈米孔洞之醋酸纖維素微管陣列薄膜應用於內毒素移除

為了解決分鐘縮寫mins的問題，作者陳威澔 這樣論述：

敗血症是因革蘭氏陰性細菌死亡後釋放出的內毒素造成全身性發炎反應症候群，目前移除內毒素的方式是利用離子交換層析及親和層析，但在移除內毒素時，同時會造成蛋白質的損失。因此本研究以靜電紡絲製備醋酸纖維素微管陣列膜為基材，經過低溫電漿誘導及UV光表面接枝進行改質，使Polymyxin B接枝於CA MTAMs ( Cellulose acetate Microtube Array Membranes ) 表面，作為內毒素吸附基材，能製造出相較臨床上體積小之內毒素吸附器，並且具有高效率的移除效果。 結果顯示，從SEM ( Scanning Electron Microscopy ) 微觀結構圖發

現CA MTAMs ( CA/20 PVP 2500、CA/20 PVP 40000及CA/20 PVP 360000 ) 尺寸大小分別約為61.18 ± 6.80 µm × 37.91 ± 5.75 µm、59.31 ± 6.76 µm × 40.50 ± 4.69 µm及71.79 ± 5.93 µm × 44.10 ± 8.57 µm。管壁厚度分別為2.53 ± 0.36 µm、3.56 ± 0.54 µm及5.48 ± 0.89 µm。CA/20 PVP 2500的最大強度為6.95 ± 0.23 MPa、CA/20 PVP 40000的最大強度為5.58 ± 0.49 MPa及CA/

20 PVP 36000的最大強度為5.54 ± 0.63 MPa。其楊氏係數分別為0.53 ± 0.03 MPa、0.48 ± 0.07 MPa及0.17 ± 0.01 MPa。CA/20 PVP 2500、40000以及360000的接觸角測試分別約為78.5 ± 3.0 °、77.5 ± 5.8°及73.7 ± 1.3 °。另外，從雙液法奈米級孔徑分析儀得知CA/20 PVP 360000之平均孔徑及孔洞數目為0.190 µm及2712個/cm2。CA/20 PVP 360000壓力在14.7 psi下其流速及流量分別約為4.39 mL/min及39.2 L/hr/m2。透過細胞毒性測試

觀察1、3及5天，細胞天數隨著天數增加而增加，證明CA MTAMs及Polymyxin B皆無毒性。 透過低溫電漿及UV光表面接枝不同濃度 ( 0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75 mg/mL、1.0 mg/mL及5.0 mg/mL ) 之Polymyxin B於CA MTAMs，其最大接枝率為8.9 ± 0.2 %，並透過接觸角測試證明Polymyxin B接枝於CA MTAMs表面，其角度從77.5 ± 5.8 °降至17.3 ± 2.6 °。在內毒素靜態吸附結果發現，不同時間 ( 15、30、60及120分鐘 ) 的內毒素吸附濃度分別為49.8 ± 17.7 EU/m

L、75.4 ± 8.9 EU/mL、90.8 ± 4.4 EU/mL和94.9 ± 2.2 EU/mL。從血漿之循環吸附結果發現，不同時間 ( 15、、30、60及120分鐘 ) 的內毒素吸附濃度分別為74.4 ± 8.7 EU/mL、87.2 ± 4.4 EU/mL、93.6 ± 2.2 EU/mL和94.9 ± 2.2 EU/mL。由上述結果可證實，CA MTAMs具有潛力應用於內毒素的吸附移除。