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WNK4 與 MST3 之間的相互調節

為了解決Thermo Fisher stock的問題，作者王思云 這樣論述：

高血壓是一項在全球範圍發病率非常高的疾病，高血壓會增加罹患中風、心臟衰竭和腎衰竭的風險。高血壓的成因之一是由於腎小管離子通道的異常再吸收。Gordon syndrome是腎性高血壓的一種。 Gordon syndrome是由 WNK4 激酶發生基因突變使活性增加所導致NCC 離子通道的活性會增加，導致高血壓的產生。然而，WNK4 激酶並不會直接調節NCC離子通道，而是WNK4通過SPAK/OSR1調節NCC離子通道。得知在高鉀飲食中，WNK4 透過活化磷酸酶並將其SPAK 去磷酸化對於減少鉀離子的再吸收是重要的。也得知WNK4 有磷酸酶的結合為點。而我的研究想探討的MST3激酶，它 與 S

PAK / OSR1 一樣，三者都是屬於 STE 20 激酶家族成員。已有文獻指出，MST3 T178、T182、T328 三個位點對於調控MST3 功能中扮演重要角色[1]。然而，WNK4 如何調節MST3活性仍尚未被發現。先前研究發現在 MST3-/- 小鼠中 NCC 離子通道的活性是增加的。所以在我的研究中，我想透過免疫沉澱法 (IP) 觀察WNK4 是否與 MST3 相互作用，並且調控下游 NCC 離子通道的活性。在 進行IP之前，我先將 GFP 質體轉染到 Cos 7 細胞中，以找到最佳轉染效率的條件，並找出最佳的共轉染條件是將 GST-WNK4 和 HA-MST3 與 PEI 在

300 mM NaCl 溶液中混合在一起。 而我們利用HA 抗體用於免疫沉澱法中將 HA-MST3沉澱下來，且GST-WNK4 也跟著被免疫沉澱的 HA-MST3 捕獲，接著我們利用phos tag SDS gel 去證實WNK4 與MST3 之間的磷酸化變化。隨著WNK4 蛋白的增加，發現MST3 的磷酸化被抑制，但是，WNK4 所導致的MST3 去磷酸化並沒有在MST3 T328A 突變株中發現，由此可知MST3 T328 位點對於WNK4所導致的MST3去磷酸化中扮演重要的角色。相反的，WNK4 KD並不會抑制MST3 的去磷酸化。也發現隨著MST3的增加，WNK4 磷酸化被抑制；反之，

MST3 KD則不會抑制。在高鉀飲食中所誘導的MST3 去磷酸化是依賴於WNK4 的活性，且利用磷酸酶抑制劑 OA () 可以抑制WNK4 所導致的MST3 去磷酸化，表示WNK4所導致的MST3 去磷酸化與磷酸酶相關，由這些結果可表明 WNK4、MST3 兩者之間具有相互調節。

超聲波萃取技術應用於廢機油中回收潤滑基礎油

為了解決Thermo Fisher stock的問題，作者張宗蕙 這樣論述：

本研究擬採用超聲波萃取技術自廢機油中萃取出潤滑基礎油（Lube Base Oil），選用之溶劑為異丙醇（2-Propanol）與N-甲基吡咯烷酮（1-Methyl-2-pyrrolidone），N-Methyl-Pyrollidone（NMP）此種溶劑具有高度溶解力，穩定性高，操作費用低且毒性低等優點，依不同溶劑比例來進行測試。潤滑油主要應用於減少機械內零件之磨損，經過使用後會產生變質劣化現象，產生含有低分子量之碳氫化合物、芳香烴等雜質之廢機油；為節省石油資源及達成其充分利用目標，本實驗嘗試以超聲波結合雙溶劑萃取技術並搭配絮凝法（Flocculation），將此技術應用於廢潤滑油（Waste

Lube Oil, WLO）之資源再生。藉由超聲波/萃取技術進行液液兩相之質傳程序原理與溶劑親和力的不同，從廢機油中分離出石蠟烴（Paraffins），石蠟烴可作為潤滑基礎油產品。為了達到製程產率之最大化，本研究擬探討之操作變數分別為萃取溫度、超聲波震盪時間、溶劑/油比、萃取級數、超聲波功率等五個變數，擬以田口方法（Taguchi Method）之直交表（L16），以統計方法獲得各操作變數之影響度與萃取製程最佳條件，另以統計軟體Design-Expert進行變異數分析（ANOVA），加以分析實驗數據，佐證田口方法之操作變數影響度分析，作為超聲波萃取潤滑基礎油之商業化評估，進而達成廢潤滑油循環

材料高值化之終極目標。本研究擬以實驗級規模進行批式之超聲波萃取測試，測試溶劑必須符合與廢潤滑油互不相溶之要求，萃取後之基礎油相先經由真空減壓濃縮機將溶劑回收，再利用高效層析/質譜儀（HR-GC-MS）鑑定油品成份，後續進行黏度指數（VI）、動黏度（40℃ / 100℃）之性質測試，以確認使用雙溶劑（異丙醇和NMP）是否比使用單一溶劑（異丙醇）有更好的萃取效率與性質。